細胞培養(yǎng)操作步驟：

1.吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；

2.吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；

（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴(yán)重影響細胞狀態(tài)，導(dǎo)致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮?；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3.加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

4.將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

注意事項：不同品牌胰-酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。