白介素ELISA試劑盒是一種基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)開發(fā)的精密檢測(cè)工具，其核心用途是定量分析生物樣本中特定白介素（細(xì)胞因子）的濃度水平。白介素在免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞增殖中發(fā)揮關(guān)鍵作用，該試劑盒為相關(guān)疾病的診斷、療效監(jiān)測(cè)及機(jī)制研究提供了重要的數(shù)據(jù)支持。

　　在檢測(cè)原理上，該試劑盒普遍采用高特異性的雙抗體夾心法。首先，將純化的人白介素抗體預(yù)包被于微孔板上制成固相載體；隨后依次加入待測(cè)樣本、生物素化檢測(cè)抗體以及辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，形成“抗體-抗原-抗體-酶”的復(fù)合物。經(jīng)過(guò)徹d洗滌去除雜質(zhì)后，加入TMB底物顯色。TMB在HRP酶的催化下由藍(lán)色轉(zhuǎn)化為黃色，顏色的深淺與樣本中的白介素濃度呈正相關(guān)，最終通過(guò)酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本含量。

　　白介素ELISA試劑盒的使用方法：

　　一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　1.試劑盒試劑平衡

　　試劑盒從4℃取出，室溫平衡20?30 min；濃縮洗滌液低溫出現(xiàn)鹽結(jié)晶，37℃水浴溶解后再稀釋。

　　濃縮洗滌液：按說(shuō)明用蒸餾水配成1×洗滌工作液（常見20×濃縮：1份濃縮液+19份純水）。

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品：加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，靜置10?15 min，做倍比梯度稀釋，設(shè)置7個(gè)濃度梯度+空白孔，建議樣本與標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔減少誤差。

　　生物素抗體、HRP親和素工作液：臨用前現(xiàn)配現(xiàn)用，不可提前配制存放。

　　未使用的酶標(biāo)板條放回鋁箔袋，加干燥劑密封，4℃保存，不要冷凍。

　　2.待測(cè)樣本處理

　　樣本類型：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿

　　血清/血漿：采血后離心分離上清，避免溶血；溶血樣本會(huì)造成背景偏高。

　　細(xì)胞上清：收集后1000?3000g離心去除細(xì)胞碎片。

　　組織樣本：勻漿后5000g離心取上清，建議加蛋白酶抑制劑。

　　樣本短期4℃，長(zhǎng)期?20℃或?80℃，避免反復(fù)凍融；濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，用樣本稀釋液預(yù)稀釋并記錄稀釋倍數(shù)。

　　二、完整操作步驟（通用夾心法）

　　加樣孵育（抗原結(jié)合）

　　取出需要的酶標(biāo)板條；設(shè)置：標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔、空白孔。

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品；

　　樣本孔：加入稀釋后的待測(cè)樣本；

　　空白孔：加入樣本稀釋液。

　　每孔總體積參考說(shuō)明書（50?100μL），封板膜密封，37℃恒溫孵育60?90 min。

　　洗板

　　揭開封板膜，甩干孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干；每孔加滿1×洗滌液，浸泡30?60 s，甩干拍干；重復(fù)洗板3?5次。

　　洗板是ELISA成敗關(guān)鍵，洗板不充分會(huì)造成背景高、假陽(yáng)性；可手工洗板或全自動(dòng)洗板機(jī)。

　　加入生物素化檢測(cè)抗體

　　除空白孔外，每孔加入生物素化抗體工作液；封板，37℃孵育30?60 min；孵育結(jié)束再次洗板3?5次。

　　加入HRP?鏈霉親和素（SABC）工作液

　　每孔加入酶結(jié)合物工作液，封板，37℃孵育20?30 min；結(jié)束洗板5次，盡量拍干殘留洗液。

　　TMB底物顯色

　　每孔加入TMB顯色液，37℃避光孵育10?20 min；觀察孔內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)色梯度，梯度明顯即可終止，不要顯色過(guò)深。

　　終止反應(yīng)

　　每孔加入終止液，液體由藍(lán)色變?yōu)辄S色；15?30 min內(nèi)酶標(biāo)儀讀數(shù)，主波長(zhǎng)450 nm，推薦540/570 nm做校正波長(zhǎng)，降低板底干擾。

　　數(shù)據(jù)計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸，OD值為Y軸，用四參數(shù)擬合（4?PL）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；代入樣本OD得到測(cè)定濃度，再乘樣本稀釋倍數(shù)得到原始樣本白介素濃度。

　　三、試劑盒保存與維護(hù)

　　整套試劑盒2?8℃冷藏，嚴(yán)禁冷凍；酶標(biāo)板條防潮。

　　濃縮洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品、抗體、酶結(jié)合物按說(shuō)明書條件保存；TMB底物避光保存，變藍(lán)失效不可使用。

　　配制好的1×洗滌液建議現(xiàn)配現(xiàn)用，2?8℃最多存放3天。

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品溶解后分裝凍存，避免反復(fù)凍融。