本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng)，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清（10%）。本培養(yǎng)體系是基于固定配方配制的液態(tài)培養(yǎng)體系，可以為體外培養(yǎng)的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物的小梁網(wǎng)細胞提供一個確定適宜的平衡營養(yǎng)環(huán)境，并且可以選擇性的促進小梁網(wǎng)細胞的擴增。

純度提升優(yōu)化：

差速貼壁純化法‌：將消化后的細胞懸液先接種到普通塑料培養(yǎng)皿中，37℃孵育2小時后，成纖維細胞會優(yōu)先貼壁，此時收集未貼壁的細胞懸液，轉移到明膠包被的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)，可去除90%以上的成纖維細胞污染。

‌選擇性培養(yǎng)基篩選‌：在培養(yǎng)基中添加100μg/mL的G418，處理24小時，內皮細胞對該濃度的抗生素敏感性遠高于小梁網(wǎng)細胞，可選擇性清除混雜的血管內皮細胞，進一步提升細胞純度。

‌定期標志物鑒定‌：每傳代2次就通過免疫熒光染色檢測層黏連蛋白、纖維連接蛋白等小梁網(wǎng)特征標志物，同時排除CD31內皮標志物陽性的雜細胞，確保細胞純度≥95%。

注意事項：

組織取材必須在供體死亡6小時內完成，超過12小時的眼球樣本幾乎無法成功分離出活性合格的原代小梁網(wǎng)細胞。

消化過程嚴格控制酶解時間，膠原酶消化超過3小時會導致細胞活性大幅下降，后續(xù)貼壁效率不足30%。

傳代次數(shù)嚴格控制在P4代以內，超過P5代的細胞會出現(xiàn)明顯的表型丟失，失去原代小梁網(wǎng)細胞的房水調控功能，實驗數(shù)據(jù)可靠性大幅降低。