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發(fā)布時間：2023/9/26
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土壤木質(zhì)素過氧化物酶（Soil lignin peroxidase，S-Lip）試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
木質(zhì)素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶，屬于木質(zhì)素降解酶系，在木質(zhì)素生物降解、造紙工業(yè)、紡織工業(yè)、芳香化合物轉(zhuǎn)化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應用潛力。
測定原理：
木質(zhì)素過氧化物酶氧化藜蘆醇生成藜蘆醛，在310nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。
試劑組成和配制：
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣風干，過30-50目篩。
測定操作：
對照管 | 測定管 | |
土樣（g） | 0.04 | 0.04 |
甲苯（μL） | 30 | 30 |
25℃靜置15min | ||
試劑一（μL） | 200 | |
蒸餾水（μL） | 200 | |
試劑二（μL） | 120 | 120 |
試劑三（μL） | 80 | 80 |
30℃震蕩反應3h，冰浴5min，12000g，4℃離心10min，取上清200μL，于微量石英比色皿/96孔板(UV)板，測定310nm處吸光值，分別記為A對照和A測定，△A=A測定- A對照 | ||
酶活計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活力單位。
S-LiP活性（nmol/d /g 土樣）= 
×V反總÷W÷T= 344×△A÷W
ε：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應總體積，0.4mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，3h
b. 用96孔板測定的計算公式如下
酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活力單位。
S-LiP活性（nmol/d /g 土樣）= ×V反總÷W÷T= 688×△A÷W
ε：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應總體積，0.4mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，3h
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