土壤熒光素二乙酸酯（FDA）水解酶（Soil-Fluorescein diacetate，S-FDA）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

注   意 ：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。

測(cè)定原理：

FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在 490nm 處有強(qiáng)吸收峰，通過檢測(cè) 490nm 處的吸光值變化可計(jì)算得FDA 水解酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制：

標(biāo)準(zhǔn)液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑 1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 4mL 試劑三溶解。

試劑三：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

樣本處理：

稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g，備用。

測(cè)定操作表：

注 意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

酶活性計(jì)算公式：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W

= 0.96×（△A2÷△A1）÷W

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。

S-FDA 活性（μmol/d/g 土樣）=（△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷W

= 0.96×（△A2÷△A1）÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：

標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/L；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1.盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。

2.測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。